DNA提取是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常見的實(shí)驗(yàn)步驟，用于分離和純化DNA以進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)分析。本文將介紹使用天根質(zhì)粒 DNA 提取試劑盒進(jìn)行質(zhì)粒基因提取的實(shí)驗(yàn)步驟。該試劑盒使用堿裂解法提取質(zhì)粒DNA ，具有簡便快速、高效純化的特點(diǎn)。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
一、培養(yǎng)細(xì)菌并制備含有質(zhì)粒的細(xì)胞懸液：
1. 從平板上挑取單克隆細(xì)菌，轉(zhuǎn)入含有3mL LB+Amp100培養(yǎng)基的試管中。使用含有抗生素氨芐青霉素的LB 培養(yǎng)基可以選擇性地培養(yǎng)含有質(zhì)粒的細(xì)菌群體。
2. 在37℃的恒溫?fù)u床上振蕩培養(yǎng)過夜，以促進(jìn)細(xì)菌生長并擴(kuò)增質(zhì)粒。
二、收集和裂解細(xì)胞，分離并純化質(zhì)粒DNA：
3. 將培養(yǎng)液倒入1.5 mL微量離心管中，以4000 r/min離心 2 min，使細(xì)菌沉淀。
4. 倒出培養(yǎng)液，使細(xì)胞沉淀盡可能干燥。
5. 加入100 μL溶液Ⅰ（ 50 mmol/L葡萄糖，25mmol/LTris (pH 8.0)，10 mmol/L EDTA （ pH 8.0）），充分振蕩混勻，室溫放置5 min。
6. 加入200 μL溶液Ⅱ（ 0.2 mol/L NaOH，1% SDS），蓋緊管口，顛倒混勻內(nèi)容物，將離心管放置冰上5 min 。
7. 加入150 μL溶液Ⅲ（ 5 mol/L乙酸鉀），蓋緊管口，顛倒數(shù)次使混勻。冰上放置5 min。
8. 以12000 r/min離心15 min，將上清轉(zhuǎn)至另一離心管中。
9. 可選擇性地加入等體積氯仿/異戊醇（24:1）進(jìn)行去蛋白處理，使 DNA與蛋白質(zhì)分離。反復(fù)混勻后，以10000 r/min離心10 min，將上清轉(zhuǎn)移到另一離心管中。該步驟可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇性地進(jìn)行。
10. 向上清中加入2倍體積的乙醇（約700μ L），混勻后，室溫放置15-30min。以10000 r/min離心 10 min 。倒去上清液，將離心管倒扣在吸水紙上，吸干液體。
11. 用500 μL 70% 乙醇輕輕洗滌質(zhì)粒 DNA沉淀，以10000 r/min離心5min，棄去上清液，并使沉淀干燥。
12. 加入適量（20-50 μL）的無菌水，室溫使 DNA全溶解，然后將溶解的DNA在-20℃保存。
實(shí)驗(yàn)中，天根質(zhì)粒DNA提取試劑盒提供了各種試劑和緩沖液，方便實(shí)驗(yàn)操作和質(zhì)粒 DNA的提取。這些試劑的配方經(jīng)過優(yōu)化和驗(yàn)證，確保提取的質(zhì)粒 DNA質(zhì)量好、純度高。
注意事項(xiàng)：
1. 溶液Ⅱ需要新鮮配制，以確保高效的細(xì)胞裂解和DNA解鏈。
2. 加入溶液Ⅱ后不要?jiǎng)×艺鹗帲悦庥绊?/span>DNA質(zhì)量。
3. 沉淀DNA通常使用冰冷的乙醇，加入后放置時(shí)間稍長可使DNA 沉淀全，并可用異丙醇代替乙醇，但需注意異丙醇會(huì)將鹽沉淀下來。
4. 在DNA溶解過程中，溫度要嚴(yán)格控制，避免過高的溫度導(dǎo)致DNA 降解。
天根質(zhì)粒DNA提取試劑盒提供了方便、快速、高純度的質(zhì)粒DNA提取方法。根據(jù)實(shí)驗(yàn)步驟操作，可以有效提取并純化質(zhì)粒 DNA。該方法適用于大量轉(zhuǎn)化子中制備少量部分純化的質(zhì)粒DNA，滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)的需求。
蘇州阿爾法生物提供的實(shí)驗(yàn)試劑主要有：
1.細(xì)胞類產(chǎn)品：
各種的腫瘤細(xì)胞、基因編輯細(xì)胞：比如常見的HEK293細(xì)胞、CHO細(xì)胞、骨髓干細(xì)胞、胚胎2. 天根試劑盒產(chǎn)品：天根系列試劑盒主要有質(zhì)粒大提、質(zhì)粒小提等各種質(zhì)粒抽提試劑盒、血液DNA提取試劑盒、細(xì)菌DNA提取試劑盒、病毒 RNA 提取試劑盒、天根質(zhì)粒DNA提取試劑盒、 植物組織DNA提取試劑盒等各種基因組提取試劑盒。還有 DH5&/TOP--10感受態(tài)等。
3. 其他試劑類：細(xì)胞培養(yǎng)試劑、分子生物學(xué)試劑、緩沖液、培養(yǎng)基、抗體、碧云天試劑等。
